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如何选择荧光定量PCR仪器 ?

2016-07-07 16:30

1、仪器使用的广泛程度  

如果不是一个新出现的仪器品牌 ,为保证所购置的仪器有充分的可靠性 ,临床PCR实验室可以从相应仪器在国内外使用的广泛程度来判断 。应用越是广泛的仪器 ,越是经过实践验证的 ,也就越具有可靠性 。

2、仪器的检测通量(反应孔数)  

在购买定量PCR仪的时候需要根据实验室的要求来选择不同通量的仪器 。目前市面上的荧光定量PCR仪的检测通量小到16多到384孔 ,实验室可以根据自己的检测项目和发展状况 ,选择合适的仪器 ,没必要追求最昂贵的仪器 ,一般来说 ,96孔的通量足够用了;如需寻找新药靶点和疾病标记等类型的实验 ,则可以考虑购买384孔的仪器 。

3、仪器的通道数量  

随着医院开展的项目越来越多 ,比如基因表达 ,单核苷酸多态性分析、高分辨率熔解曲线等 ,那么单通道的仪器则无法满足实验室的需求了 ,而多通道的设计则能使其更方便地检测多重PCR检测及其衍生的基因表达等其他分析模式 。

4、耗材的开放性  

耗材如扩增反应管的开放性可能会决定日常检测成本的高低 。作为临床PCR实验室 ,在选择实时荧光PCR仪时 ,可考虑这一点 。不过对于检测HCV等RNA项目的时候 ,尽量使用去RNAnase酶耗材 。

5、硬件设计特点  

荧光定量PCR仪主要有96孔板式和离心式等 ,每种设计都有它的独到之处 ,但也都有无法避免的缺陷 。  

96孔板的荧光定量PCR仪可以容纳的样本量大 ,最大可至100ul ,而且无需特殊的耗材 。传统的96孔板仪器多采用卤钨灯激发、CCD检测 。其优点在于:卤钨灯的光强比LED灯强 ,波长范围广 ,对于荧光染料的激发具有非常好的效果 ,性能比较稳定 ,使用寿命约3000个小时左右;但CCD的检测通;嵋蛭扛鲅房拙喙庠春图觳馄鞯墓獬谈鞑幌嗤 ,会产生边缘效应 ,对结果产生一定的影响 。为了保证精确、精准的实验结果 ,这类仪器在实验过程中通常需要配合ROX校正染料 ,来平衡孔间差异;离心式的仪器通常选用LED激发、PMT检测 ,设计上避免了边缘效应 ,同时PMT检测对荧光信号可以放大或缩小 ,相对于CCD检测更加灵活 ,灵敏度更高;但LED的荧光强度比较弱 ,波长范围也比较窄 ,因此 ,对荧光染料的激发效果不如卤钨灯;

6、运行速度  

在荧光定量PCR仪的众多技术参数中 ,升降温速度也是非常重要的 。更快的升降温 ,可以缩短反应进行的时间 ,而且缩短了可能的非特异性结合和反应时间 ,提高PCR的特异性 。但是 ,运行速度越快 ,对加热制冷 ?榈囊笤礁 ,因此 ,稳定性是其存在的最大问题 ,如果在市面上经过长期考证的 ,稳定性好的仪器 ,运行速度越快 ,带来的便捷越多;

7、灵活性  

在仪器基本性能得到保证的情况下 ,另外一方面则需要考虑仪器的灵活性 ,主要包括:仪器运输的灵活性 ,拆卸的灵活性 ,软件升级的灵活性 , ?楦坏牧榛钚砸约笆褂玫牧榛钚缘 。

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